Các bước cơ bản của Phương pháp tách chiết DNA
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (121.32 KB, 2 trang )
HOÀNG THỊ DUNG LỚP K33C – KHOA SINH –
TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2
BÀI TIỂU LUẬN MÔN CÔNG NGHỆ GEN
1.1.1.Các bước cơ bản của Phương pháp tách chiết DNA:
- DNA có kích thước lớn do đó cần tránh các tách nhân gây đứt gãy.
- DNA genome (ĐV, TV) sau khi tách chiết phải có kích thước lớn
(15kb-300kb).
• Phương pháp tách chiết cơ bản gồm 4 bước chính sau:
Bước 1. Phá vở màng tế bào và màng nhân. Ở tế bào ĐV hoặc TV, bằng
cách nghiền tế bào hoặc mô trong nitơ lỏng – 196
0
C hoặc dùng hỗn hợp
chất tẩy (SDS, Sarcosyl) và proteinase K.
Bước 2. Loại bỏ thành phần không mong muốn
trong mẫu, như các protein, polysaccharide. Mẫu được bổ sung hỗn hợp
dung dịch (phenol: chloroform: isoamine tỉ lệ 25:24:1), lắc mạnh cho đến
khi dung dịch có dạng trắng sữa.
- Protein sẽ bị biến tính và kết tủa
- DNA, RNA được hoà tan trong nước.
Sau ly tâm cao tốc hỗn hợp dung dịch chia làm 3 pha:
+ Pha trên cùng là pha nước chứa DNA, RNA.
+ Pha giữa là pha chứa protein và các chất thứ cấp bị kết tủa.
+ Phá dưới là dung dịch phenol: chloroform: isoamine
Bước 3. Tủa axít nucleic
+ Tủa bằng ethanol tuyệt đối (tỉ lệ 2:1), tủa tốt nhất ở - 20
o
C trong 30 phút hoặc
ở 0
o
C qua đêm. Hầu như toàn bộ các phân tử axít nucleic đều kết tủa.
+ Tủa bằng isopropanol (tỉ lệ 1:1) ở 0
o
C, các phân tử DNA có trọng lượng phân tử
thấp không bị kết tủa.
>>> Sau đó ly tâm ta sẽ thu được cặn (DNA, RNA), cặn được rửa bằng cồn 70% để
loại bỏ muối và isopropanol còn lại.
Bước 4. Hoà tan căn (DNA, RNA) và xử lý loại bỏ RNA bằng enzyme
Ribonuclease. Sau đó kết tủa lại được DNA.
