Các bước cơ bản của phương pháp lai Southern và ứng dụng
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (114.13 KB, 4 trang )
Họ tên: Vũ Thị Hà
Lớp : K33C_Sinh
Trường Đại Học Sư Phạm Hà Nội 2.
-------------------------------------------000--------------------------------------------
Bài tiểu luận: Các bước cơ bản của phương pháp lai Southern
và ứng dụng.
- Phương pháp lai Southern là phương pháp lai DNA với mẫu dò (DNA).
- Gồm các bước:
+ Tách chiết DNA nghiên cứu ra khỏi mô, tế bào. Sử dụng các
enzyme giới hạn cắt DNA để tạo ra hỗn hợp các đoạn DNA có kích thước khác
nhau.
+ Tiến hành điện di hỗn hợp sản phẩm đã bị xử lý bởi enzyme
giới hạn trên gel agarose (nồng độ agarose 0.8%; đệm TBE (Tris-Borat-
EDTA), hiệu điện thế 1.5 V/cm chiều dài bản gel).
+ Biến tính các băng DNA kép trên gel điện di bằng cách xử lý
gel đã chạy điện di với khoảng thời gian 20p trong dung dịch NAOH 0.4M để
tạo thành các DNA mạch đơn.
+ Chuyển các đoạn DNA mạch đơn từ gel sang màng lai (màng
nitrocellulo, hoặc nilon filter) bằng hệ thống tạo mao dẫn (máy Bloting). Dung
dịch dẫn truyền là NAOH 0.4M. Vị trí của các đoạn DNA đơn được giữ chặt
trên màng lai.
1
+ Các đoạn DNA cố định trên màng lai được đem lai với dung
dịch mẫu dò (DNA probe) đã được đánh dấu bằng P
32
, hoặc phản ứng tạo màu.
Quá trình này được thực hiện ở buồng lai có nhiệt độ 65
0
C – 68
0
C, trong thời
gian từ 6- 12 giờ.
+ Rửa màng lai bằng lai bằng hỗn hợp Nacl, Natricitrat và nước
cất ở nhiệt độ 65
0
C từ 2-3 lần. Thấm khô bằng giấy thấm hoặc sấy khô ở nhiệt
độ 65
0
C.
+ Xác định vị trí lai nhờ kĩ thuật phóng xạ tự ghi. Nơi xảy ra
phản ứng lai sẽ phát quang và chụp được nhờ phim X quang. Nơi phát quang
sẽ thể hiện là vệt đen sau khi rửa phim X quang, và đó là vị trí lai DNA.
2
*) Ứng dụng của phương pháp lai Southern:
+ Ứng dụng để phát hiện đoạn gen cụ thể (ví dụ: phát hiện sự có
mặt và số bản sao trong cây chuyển gen)
+ Phát hiện đoạn gen tương đồng từ các cơ thể khác nhau.
3
+ Dò tìm một gen mục tiêu trong hệ gen của sinh vật nghiên cứu.
+ Xác định độ lớn của DNA.
+ Kỹ thuật Southern là phuơng pháp chuẩn để áp dụng thành
công trong nghiên cứu sự đa hình của DNA và đánh giá sự đa hình của các
đoạn giới hạn được gọi là kỹ thuật RFLP.
4
