kỹ thuật lai huỳnh quang
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (566.21 KB, 32 trang )
TÌM HIỂU KỸ THUẬT
LAI HUỲNH QUANG
TẠI CHỖ TRÊN VI
SINH VẬT
SVTH : TRƯƠNG THÀNH ĐẠT
MSSV : 60604096
GVHD : NGUYỄN THỊ THANH HUYỀN
MỤC ĐÍCH
Cung cấp chính xác thông tin về
hình thái, số lượng, không gian
phân bố hay mối tương quan với
môi trường sống của vi sinh vật.
1. Quy trình thực hiện
•
Chuẩn bị mẫu và đầu dò.
•
Trộn mẫu với đầu dò.
•
Lai giữa đầu dò và trình tự đích đặc hiệu nằm
trong tế bào.
•
Rửa mẫu để loại bỏ các đầu dò không được
lai.
•
Dò tìm mẫu (bước này có thể bỏ qua nếu sử
dụng đầu dò phát huỳnh quang trực tiếp).
•
Quan sát, hiển thị và lưu trữ kết quả.
1. Quy trình thực hiện
Đầu dò
- Đầu dò: Là những
oligonucleotide dài
từ 15 đến 30 bp, có
trình tự bổ sung với
các rRNA 16S của
tế bào vi sinh vật.
1. Quy trình thực hiện
Đánh dấu huỳnh quang lên đầu dò
Có 2 cách cơ bản:
- Đánh dấu trực tiếp: không cần
bước dò tìm sau quá trình lai.
- Đánh dấu gián tiếp: đánh dấu bằng
một số hợp chất chỉ thị trung gian,
đồng thời phải tiến hành dò tìm sau
quá trình lai.
1. Quy trình thực hiện
1. Quy trình thực hiện
Thuốc nhuộm huỳnh quang
Đặc điểm quan trọng: các chất huỳnh quang
có các mức năng lượng kích thích và phát xạ
khác nhau.
Cho phép phát hiện đồng thời hai hay nhiều
vi sinh vật khi chỉ lai một lần duy nhất.
1. Quy trình thực hiện
Thuốc nhuộm huỳnh quang
Tên thuốc
nhuộm
Bước sóng
MàuKích thích
(nm)
Phát xạ
(nm)
AMCA 351 450 Xanh dương
FITC* 492 528 Xanh lá cây
FluoXE** 488 520 Xanh lá cây
TRITC*** 557 576 Đỏ
Texas Red 578 600 Đỏ
Cy3 550 570 Cam/Đỏ
Cy5 651 674 Hồng ngoại
1. Quy trình thực hiện
Chuẩn bị mẫu và xử lý sơ bộ
Mục đích: đưa được số lượng lớn các
đầu dò thấm được vào tế bào, giữ lại tối
đa số lượng các trình tự đích RNA, đồng
thời bảo quản toàn vẹn cấu trúc tế bào và
hình thái của chúng.
Hình thức: ngâm mẫu trong các dung
dịch hoặc xử lý bằng enzym.
1. Quy trình thực hiện
Lai
Yêu cầu:
Kết hợp chính xác các đầu dò
đánh dấu huỳnh quang với trình tự
đích bổ sung với chúng với số
lượng lớn nhất.
1. Quy trình thực hiện
Lai
Điều kiện:
Môi trường tối ẩm.
Nhiệt độ vào khoảng 37 đến 50
o
C.
Thời gian lai có thể kéo dài từ 30
phút đến vài giờ.
