Kĩ thuật tách chiết ADN, ARN
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (994.87 KB, 20 trang )
11
KyKyѺѺ thuthuââҕҕt t
tataғғch chich chiêêғғt t
ADN, ARNADN, ARN
22
33
1.1 Tách chiӃt DNA bӝ gen
Nguyên lý chung
1. Lҩy máu (tӃ bào hoһc dӏch sinh hóa)
2. Phá vӥ cҩu trúc tӃ bào (EDTA, Chloroform, SDS «)
3. Tӫa DNA
44
55
Phân tích đPhân tích đӏӏnh tính nh tính ƛƛ đđӏӏnh lnh lưӧưӧng DNAng DNA
Đo quang phĐo quang phәә
NhuNhuӝӝm hum huǤǤnh quangnh quang
NhuNhuӝӝm Bm Bҥҥc nitratc nitrat
ĐiĐiӋӋn din di
66
Đo quang phĐo quang phәә
Ánh sáng khi đi qua môi trưӡng lӓng sӁ bӏ các
phҫn tӱ vұt chҩt trong môi trưӡng đó hҩp thu mӝt
phҫn. sӵ hҩp thu ánh sáng gia tăng khi nӗng đӝ các
phҫn tӱ vұt chҩt trong môi trưӡng đó gia tăng
ĐӍnh hҩp thө các nucleic acid là ӣ 260nm trong
vùng tӱ ngoҥi
77
Đo quang phĐo quang phәә
Sӵ hҩp thө ӣ dây đưӧc tính bҵng đơn vӏ OD
(Optical Density). Mӝt đơn vӏ đơn vӏ hӋ sӕ chuyӇn đәi
OD tương ӭng vӟi :
50Qg/ml DNA sӧi đôi
40Qg/ml RNA
33Qg/ml DNA sӧi đơn
88
Đo quang phĐo quang phәә
Tính tӹ lӋ OD(260)/OD(280) đӇ ưӟc lưӧng đӝ
tinh sҥch cӫa dung dӏch nucleic acid.
NӃu tӍ lӋ này nҵm trong khoҧng 1,8 ƛ 2 dung
dӏch nucleic acid đưӧc xem là tinh sҥch.
Đӕi vӟi dung dӏch DNA sӧi đôi, sӵ hҩp thө bưӟc
sóng 260nm tăng lên khi phân tӱ DNA bӏ biӃn tính tӭc
là khi hai sӧi đơn tách rӡi nhau => hiӋu quҧ siêu sҳc
99
NhuNhuӝӝm DNAm DNA
NhuNhuӝӝm hum huǤǤnh quang (EtBr nh quang (EtBr ƛƛ Ethidium Ethidium
Bromid) : phát quang màu cam khi quan Bromid) : phát quang màu cam khi quan
sát dsát dưӟưӟi ánh sáng ti ánh sáng tӱӱ ngongoҥҥi i (302 nm)
NhuNhuӝӝm vm vӟӟi dd Bi dd Bҥҥc:c:
1) Dung dӏch diamine bҥc hoһc
ammonical bҥc cho thҩm vào gel
2) Dung dӏch bҥc nitrate vào gel trong
môi trưӡng acid yӃu
1010
Đi͏n diĐi͏n di
Nguyên lý cӫa điӋn di DNA
Trong điӋn trưӡng, do tích điӋn âm nên các phân tӱ
DNA dӏch chuyӇn vӅ phía anode và vӟi tӕc đӝ dӏch chuyӇn
cӫa chúng khác nhau phө thuӝc vào khӕi lưӧng phân tӱ.
Các đoҥn DNA càng lӟn thì dӏch chuyӇn càng chұm.
KӃt quҧ là tӯ mӝt điӇm chung (giӃng) các đoҥn DNA
khác nhau dӏch chuyӇn phân bӕ ӣ các vӏ trí (các băng - band)
tương ӭng vӟi đӝ lӟn cӫa chúng.
1111
11. Đi͏n di agarose. Đi͏n di agarose
1212
1313
1414
ĐiӋn di các mүu DNA giӕng nhau ӣ các nӗng đӝ
agarose khác nhau. A: 1%, B: 1,5% và C: 2%.
1515
