Tinh sạch Protein
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (93.39 KB, 7 trang )
Tinh sạch protein
I. Giới thiệu chung
Sự tinh sạch của protein rất quan
trọng vì từ protein tinh sạch chúng
ta có thể xác định được trình tự
acid amin, mối liên hệ về tiến hóa
giữa các protein trong những cá thể
khác nhau và khảo sát các chức
năng sinh hóa của các protein đó.
Hơn thế nữa, việc tinh thể hóa
protein chỉ có thể thực hiện với
những protein tinh sạch và từ
những tinh thể đó chúng ta sẽ biết
được cấu trúc bậc 4 cũng như các
đơn vị chức năng của protein thông
qua dữ liệu chiếu xạ tia X.
Vì vậy, quá trình tinh sạch protein
không ngừng được cải tiến để đạt
được độ tinh sạch cao nhất nhưng
nhìn chung một quá trình tinh sạch
protein cũng cần đi qua các bước
căn bản sau:
1. Nhận biết protein mục tiêu
2. Ly trích protein từ tế bào
3. Thu nhận protein mục tiêu dựa
trên độ hoà tan, kích thước, điện
tích, và liên kết ái lực
4. Phân tách protein bằng điện di
trên gel
5. Xác định trọng lượng và khối
lượng của protein
II. Nhận biết protein mục
tiêu
Kết quả của sự tinh sạch là một
mẫu protein chỉ chứa đúng một loại
phân tử, ở đây là một loại protein
mà nhà sinh hóa quan tâm. Mẫu
protein này chỉ là một phân đoạn
chiếm 1% vật liệu ban đầu, vốn có
thể là dịch nuôi cấy tế bào hay một
cơ quan riêng biệt lấy của thực vật
hay động vật. Để xác định được
protein mục tiêu từ hỗn hợp
protein, nhà sinh hóa cần thực hiện
một thử nghiệm dựa vào đặc tính
của protein đó. Nếu protein mục
tiêu là một enzyme thì thử nghiệm
sẽ được thực hiện dựa trên hoạt
tính của enzyme đó. Cụ thể như với
enzyme lactate dehydrogenase, một
enzyme có vai trò trong việc sản
xuất năng lượng từ glucose cũng
như tổng hợp glucose từ lactate, để
xác định enzyme này thì dựa trên
phản ứng của nó trong tế bào
Sau đó, dựa vào khả năng hấp thụ
ánh sáng mạnh ở bước sóng 340nm
của Nicotinamide adenine
dinucleotide (NADH), ta có thể đo
được lượng ánh sáng được hấp thụ
ở bước sóng 340nm trong một đơn
vị thời gian để xác định hoạt tính
của enzyme lactate dehydrogenase.
Trên thực tế việc tìm ra một thử
nghiệm hiệu quả thường rất khó,
nhưng nếu có được một cách thử
nghiệm càng đặc hiệu thì quá trình
tinh sạch càng hiệu quả. Tuy nhiên,
để chắc chắn quá trình tinh sạch
hoạt động tốt, chúng ta còn cần một
thông số là lượng protein có trong
hỗn hợp được thử nghiệm. Hiện
nay có rất nhiều phương pháp phát
hiện nhanh và chính xác nồng độ
protein. Dựa vào 2 thông số thực
nghiệm là hoạt tính enzyme và
nồng độ protein, ta có thể xác định
hoạt tính riêng của enzyme tức là tỉ
lệ hoạt tính enzyme với hàm lượng
protein có trong mẫu thử nghiệm.
Hoạt tính riêng càng cao thì quá
trình tinh sạch càng hiệu quả hay
