QUY TRÌNH NUÔI cấy tế bào sơ PHÔI một lớp
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (50.68 KB, 2 trang )
QUY TRÌNH NUÔI CẤY TẾ BÀO SƠ PHÔI MỘT LỚP
VẬT LIỆU:
TRỨNG có phôi 11 ngày tuổi ( phôi gà: 9-11 ngày tuổi, phôi vịt 11-14 ngày tuổi)
PBS (-)
MEM 1X
MEM 10% FBS
FCS
Trypsin 1x trong PBS
Gentamycin ( 40mg/1ml)
Trypan Blue
Cốc đong 500ml, chai 250, phễu, pank và kéo, Gạc, buồng đếm tế bào, ống ly tâm 15,
chai nuôi tế bào T25, T75
2. Phương pháp
MỔ TRỨNG LẤY PHÔI
↓
XỬ LÝ PHÔI
↓
TRYPSIN TÁCH TẾ BÀO PHÔI
↓
LY TÂM VÀ THU CẶN
↓
ĐẾM TẾ BÀO VÀ RA CHAI
↓
THEO DÕI SỰ PHÁT TRIỂN CỦA TẾ BÀO
1.
-
MÔI TRƯỜNG
CẦN CHUẨN BỊ
CÁC BƯỚC
TIẾN HÀNH
B1: MỔ
TRỨNG LẤY
PHÔI
CỤ THỂ CHI TIẾT
GHI CHÚ
- Sát trùng trứng bằng cồn 70
- Dung pank làm vỡ vỏ trứng
- Dung kéo cắt vỏ
Dung pank mở màng, gắp phôi vào trong cốc
đong 500 có sãn PBS (-) để rửa.
- Sau khi rửa B1 đặt vào đĩa lồng pettri
- Cắt bỏ đầu, chân, các cơ quan nội tạng
- Chuyển thân phôi sang đĩa pettri có Trypsin1X rửa
phôi
- Dung pank nhẹ nhàng ép phôi để loại bỏ hết máu
- Chuyển phôi ra khỏi dung dịch rửa, để ráo nước,
chuyển sang đĩa petttri vô trùng.--> dung kéo vô
trùng cắt nhỏ phôi.
- PHÔI đã cắt cho vào chai 250ml
-
B2: XỬ LÝ
PHÔI
B3: TRYPSIN
TÁCH TẾ
BÀO PHÔI
-
ᶬ
Them 15ml trypsin 1x lắc đều +150 L
Gentamycin
Khuấy từ 20 phút ở nhiệt độ phòng.
Lọc dịch nổi bằng phễu có 8 lớp vải gạc cho
-
B4: LY TÂM
VÀ THU CẶN
-
B5: ĐẾM TẾ
BÀO VÀ RA
CHAI
B6: THEO DÕI
SỰ PHÁT
TRIỂN CỦA
TB
-
vào ống ly tâm 50
Them 10ml MEM 1x để trung hòa trypsin.
Huyễn dịch thu được ở lần đầu ly tâm
500v/p/ 10 phút( t0 phòng)
Thu cặn pha loãng TB: 3ml MEM 10%FBS.
Đánh tan cặn.
Pha 100ᶬl TB+ 100ᶬl trypanblue đếm TB
trên buồng đếm
Ra chai 2*106 cell/chai, 6ml/ chai T25
Nuôi 370C, 5% CO2 TB mọc thành lớp
