công nghệ DNA tái tổi hợp
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (1.93 MB, 23 trang )
t tái tổ hợp DNA
Vector
Plasmid
Phage
Khả năng mang gen mục tiêu 15-23kb
Plasmid pBR322
NST nhân tạo
MCS (Multicloning site)
Số lượng bản sao 1000 bản
Khả năng mang gen mục tiêu
3 -10kb
Khả năng mang gen mục tiêu 1-2Mb
Câu hỏi
Một SV B khi tiến hành phân tích trình tự để RE nhận diện thì ghi
NheI
nhận được kết quả như sau
HindIII EcoRI
EcoRI
HindIII
HindIII
EcoRI
NheI
EcoRI
HindIII
NheI
Hỏi SV B nên sử dụng enzyme RE nào để xử lí trình tự mục tiêu và
plasmid
Câu hỏi
Sau khi thu nhận được gene MaSp1, SV A tiếp tục thực hiện quá
trình chèn gene MaSp1 vào vector nhằm mục tiêu để tạo vector tái
tổ hợp.
Đối với gen MaSp1, SV A đã tiến hành xử lí MaSp1 bằng FatI nhằm
tạo đầu dính. Tuy nhiên, SV A phát hiện ra đã sử dụng hết FatI sau
khi xử lí MaSp1. Hỏi SV A cần sử dụng enzyme nào để xử lí plasmid
để có thể chèn được MaSp1 vào plasmid. (Giả sử rằng plasmid đều
có vị trí để các RE nhận diện)
FatI
EcoRV
EcoRI
HindIII
AfIII
SphI
II. Kỹ thuật tái tổ hợp DNA
Enzyme nối (ligase)
II. Kỹ thuật tái tổ hợp DNA
Enzyme nối (ligase)
Xử lí RE
Trình tự mục tiêu
Vector tái tổ hợp mang
trình tự mục tiêu
Vector
Vector tái tổ hợp không
mang trình tự mục tiêu
II. Kỹ thuật tái tổ hợp DNA
Tế bào chủ
Tế bào prokaryote
Vi khuẩn E. coli
(gram âm)
Vi khuẩn B. subtilis
(gram dương)
Thực vật
Eukaryote
Nấm men S. cerevisiae
Nấm men P. pastoris
Tế bào côn trùng
Tế bào buồng
trứng chuột
hamster (CHO)
II. Kỹ thuật tái tổ hợp DNA
Quy trình thực hiện
Sàng lọc khuẩn
lạc mục tiêu
Sản lọc chủng vi khuẩn mang
vector tái tổ hợp thông qua
các gene sàng lọc
Môi trường bổ sung
ampicillin
II. Kỹ thuật tái tổ hợp DNA
Các chủng mang vector
tái tổ hợp
Sàng lọc bằng kháng sinh
Nephila clavipes
E. coli BLR (DE3)
Tổng hợp hóa học
monomer oligo
RE
RE
MaSp1 (15X)
...
Enzyme cắt giới
hạn NheI và SpeI
Plasmid pET30 đã được biến đổi
