E. coli

: Chính quy
Chuyên ngành
Khoa

: CNSH - CNTP

Khoá

: 2011

2015

THÁI NGUYÊN - 2015


VITAMIN A TRONG E. coli

: Chính quy
Chuyên ngành

:
: K43 - CNSH

Khoa

: CNSH - CNTP
: 2011

2015

Khoa CNSH-CNTP

THÁI NGUYÊN - 2015


i

n,

h

Sinh viên

L


ii

Trang
..................................................................... 19
EcoRI và HindIII . .......................... 24
EcoRI và XbaI ............................... 24
...................................................... 26


iii

DANH M
Trang

................................................ 5
............................. 6
.............. 10
.......................................................... 10
......................................................................... 13
-crtY ............................................................. 15
-iEIB ................................................................. 16
...................................................................... 16

ng vevtor pET28......................................................... 21
....................................................... 27
-crt

i

EcoRI và HindIII............................................................................. 29
-Y.................................... 30
hai Ezyme EcoRI và
HindIII............................................................................................. 31
crtY trong vector pET-Y ..... 32
crtY trong pET-Y.. 33
-iEIBY................. 34
Hình 4.7: K

-

XbaI

và EcoRI.......................................................................................... 35
-iEIBY . 36

i
Hình 4.10: B

....................................................... 37
pET- iEIBY trong E. coli BL21............................. 38


iv

Bp

: Base pair

DNA

: Deoxyribonucleic Acid

E. coli

: Escherichia coli

EDTA

: Etilendiamin tetraaxetic acid

IPTG

: Isopropyl Thiogalactoside

Kb


: Kilo base

LB

: Laria Broth

TAE

: Tris-acetate-EDTA

X-gal

: 5-bromo-4-chloro-3-indoly- -D-galactoside


v

Trang
PH N 1. M
1.1

tv

U .......................................................................................... 1
................................................................................................ 1

1.2. M c tiêu nghiên c u ............................................................................... 2
tài.................................................................................... 3
c .............................................................................. 3

c ti n............................................................................... 3
PH N 2. T NG QUAN NGHIÊN C U....................................................... 4
khoa h c c

tài ....................................................................... 4

2.1.1 Provitamin A và vai trò c a provitamin A trong th c ti n................ 4
ng t ng h p provitamin A ............................................. 8
2.2. T ng quan các nghiên c

c................................... 14

2.2.1. Tình hình nghiên c u v

c ........................ 14

2.2.2. Tình hình nghiên c u v provitamin A trên th gi i ...................... 14
PH

NG, N

U......15

ng và v t li u nghiên c u.......................................................... 15
ng nghiên c u ...................................................................... 15
3.1.2. V t li u nghiên c u......................................................................... 15
3.1.3. Hóa ch t .......................................................................................... 17
3.1.4. D ng c và thi t b nghiên c u....................................................... 19
m và th i gian nghiên c u......................................................... 20
3.3. N i dung................................................................................................ 20

3.3.1 N i dung 1........................................................................................ 20
3.3.2 N i dung 2........................................................................................ 20
u ................................................................. 20


vi

PH N 4. K T QU VÀ TH O LU N ...................................................... 28
4.1
idi-crtE-crtI-crtB-crt

....................................... 28

4.1.1. K t qu g n crtY vào vector pET28 t o vector tái t h p pET-Y 28
4.1.2 K t qu g n c m gene iEIB (idi, crtE, crtI, crtB) vào vector pET-Y
t o vector tái t h p pET-iEIBY..................................................................... 34
4.2. K t qu
PH N 5. K T LU

u hi n c a pET- iEIBY trong E. coli BL21 .... 38
NGH ........................................................... 39

5.1. K t lu n ................................................................................................. 39
5.2. Ki n ngh ............................................................................................... 39


1

1.1
Provitamin A (ß-


à
-

p

(Vilchez và cs,
2011)[8]. Ngoài ra p
(Takahashi và cs, 1998)[9].

-caroten, ßcaroten, lycopene, lutein và crytoxamthin (Rao and Rao, 2007)[10]. Ngoài ra
p
(

6)[4],

pro

(Paiva and Russell, 1999)[11]

p

(Lee
và cs, 2003)[12]

provitamin


2


(Johnson và cs, 1996)[13]

p
p
p

ng là con

-

(Slattery và cs, 2000)

p

p
p

provitamin A trong
E. coli
p

e idi,

crtE, crtI, crtB và crtY
p


3

E. coli


-

.
E. coli tái

-

coli sau này.

p


4

2.1.1

p
provitamin A

40

(Britton, 1995)[15].

trans

cis,
trans (Britton,

1995)[15].


(C40H56) (hình 2.1)


5

provitamin A

, 2005)[2].
-

, 2005)[2].
p
Theo WHO

mù, và còn làm


6

óa 100 % (Vilchez và cs, 2011)[8].

n


7

(Bertram, 1999)[17].

(Misawavà cs, 1991)[18].

Provitamin A

bào (Heller và cs, 1998)[19]

oxy hóa và viêm (Heller và cs, 1998)[19]
hay

carotenoid tham gia vào quá trình

carotene (Palozzavà cs, 2008)[20].
hóa gây nên (Singh và cs, 1995)[21]


8

(Dhalla và cs, 2000)
provitaminA
provitaminA
(Reaven và cs,
1994)[23].

(Gordon and Schooff,
2002)[24].
interleukin-2 và intelukinp
(Ausich, 1997)

(Ausich, 1997); (Johnson and Schroeder, 1996) [25][13].

(Del Campo và cs, 2000)[26].
2.1.2


provitamin A
p
provitamin A nói riêng

enyl diphosphate và dimethylallyl diphosphate. Có hai con


9

-C-methyl-D-erythritol 4-

-CoA thành

và glyceraldehyde-3-

provitami

-

-

-caroten (Ernst,

-

-15-

2002)[27].


(Ernst, 2002)[27].

-


10

(Ernst, 2002)[27].

(Ernst, 2002)[27].

(Ernst, 2002)[27].
ProvitaminA


11

t
carotenoid

(Ausich, 1997)[25].

(Bailey, 1991)[28]

(Ikeda and Katsumata,
1992)[29]
chính
.

gi

(P. Lee, 2002)


12

có th

(Yutaka Miura, 1998)

qua

a chúng.

(Norihiko Misawa, 1990)[32].

coli
E. coli
.000 gene. E.

.693.
coli
gene

c
E. coli

E. coli
chép các DNA plasmid v
-



13

E. coli

Hình 2.5 H

E. coli

h

:

E. coli

e
recA

E. coli

- dependent-

E. coli

zyme

E. coli


14


p

-

thành công

-

u carotenoid (provitami
phò
i
cs)[4].
-

gene crtI mã

-

E. coli

p
p

-

provitamin
Raman Babu và cs, 2012)[33]
gene
(Schmidt MA và cs, 2014).[34]


thành công


15

E. coli

-

.

Gene crt
Gene crtY (1161 bp), mã hóa cho enzyme lycopene cyclase, xúc tác cho
crt

EcoRI và HindIII. Vector pLUG-crt

crtY.

-crtY


16

idi-crtE-crtI-crtB
e idi-crtE-crtI-crtB

vào vector pRSET-


e.

-iEIB
Vector pET 28


17

Thành ph n
T7 Promoter

Vùng kh

u sao chép

V

Vai trò

V trí

Ki m soát ch t ch s bi u
hi n c a gene
Cho phép t o ra s

ng l n

trong E. coli
Cho phép g n gene quan tâm


Xpress fwd primer

Base 368-386

Base 3207-3889
Base 158-204
Base 222-240

0RF frame 1

V

c1

Base 523- 1023

0RF frame 2

V

c2

Base 3995-4810

origin

Cho phép t ng h p DNA

by Alkaline Lysis with SDS
- Solution I: + Tris HCl 1M pH8

+ EDTA 0.5M pH8
+ glucose, H2
- Solution II: + NaOH 3M
+ SDS 10%
- Solution III: + CH3COOK 3
+ CH3COOH
+ H2

Base 3270-3889