NỘI DUNG BÀI BÁO
I. Tóm tắt.
1. Đặt vấn đề.
2. Vật liệu phương pháp.
2.1 Khẩu phần thí nghiệm.
2.2 Cá thí nghiệm và thử nghiệm cho ăn.
2.3 Thu thập và phân tích.
2.4 phân tích và thống kê
3. Kết luận.
4. Thảo luận.
II. Lời cảm ơn.
III. Tài liệu tham khảo.

1
“Ảnh hưởng các mức độ khác nhau của vitamin C trong thức ăn
đến tăng trưởng và acid ascorbic thay đổi trong các mô ở cá vẹt
(Oplegnathus fasciatus)”
”Xiaojie Wang, Kang-Woong Kim,Sungchul C. Bai,Min-Do Huh, Byong-Youl Cho
I. Tóm tắt.
- Một thử nghiệm cho ăn 11 tuần đã được tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng của các mức
độ khác nhau của vitamin C trong thức đến ăn tăng trưởng, nồng độ acid ascorbic trong
các mô và thay đổi mô bệnh học ở cá vẹt. Casein và chế độ ăn gelatin dựa trên đã được
xây dựng để chứa 0, 60, 120, 240, 480 và 2000 mg L-ascorbic acid (AA) cho mỗi kg
thức ăn trên cơ sở AA tương đương trong các hình thức L-ascorbyl-2-monophosphate
(AMP) , 60 và 240 mg AA mỗi kg thức ăn như axit L-ascorbic. Tuy nhiên, mức AA
phân tích là 0, 50, 100, 205, 426 và 1869 mg AA mỗi kg thức ăn trong chế độ ăn bổ
sung AMP; 36 và 149 mg AA mỗi kg thức ăn trong axit L-ascorbic chế độ ăn bổ sung.
Do đó, chế độ ăn đã được chỉ định là AA-free, AMP50,AMP100, AMP205, AMP426,
AMP1869, AA36 và AA149. Cá trung bình 3,9 ± 0,06 g ngẫu nhiên được cho ăn các
khẩu phần thí nghiệm trong nhóm ba lần cho 11 tuần. Tăng cân (WG) của cá cho ăn và
chế độ ăn AMP50 AA36 là thấp hơn so với các nhóm khác đáng kể, và cá cho ăn chế độ

ăn uống cho thấy một AMP1869 WG cao hơn đã được cho ăn cá AMP50, AMP100,
AMP205, AA36 và chế độ ăn AA149 (P <0,05) .Tuy nhiên, không có sự khác biệt đáng
kể trong WG giữa cá ăn thức ăn AMP426 và AMP1869, và giữa các loài cá ăn AMP100,
AMP205, AMP426 và chế độ ăn AA149. Cá được cho ăn chế độ ăn uống AA-miễn phí
bắt đầu cho thấy dấu hiệu thiếu hụt, như chậm tăng trưởng, sạm, biếng ăn và tỷ lệ tử vong
cao, sau 3 tuần nuôi thử nghiệm. Sau 6 tuần kết thúc thí nghiệm,gan từ cá cho ăn chế độ
ăn uống AA-free cho thấy teo nặng. Đến cuối tuần thứ bảy, tất cả các loài cá ăn thức ăn
AA-free đã chết. Nồng độ gan AA từ cá cho ăn chế độ ăn uống AMP50 thấp hơn đáng kể
so với cá nuôi.
2
1. Đặt vấn đề.
- Vitamin C (acid ascorbic, AA) hoạt động như một đồng yếu tố trong các enzyme thủy
phân của dư lượng proline của collagen và mô liên kết của xương sống. AA cũng có chức
năng như một chất khử và là một chất chống oxy hóa. Nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng
AA là một vi chất dinh dưỡng pensable indis- cần thiết để duy trì các quá trình sinh lý
của động vật nhất định bao gồm hầu hết các loài cá (Tolbert, 1979). Cá là không thể tổng
hợp AA do thiếu các enzyme L-gulonolactone oxidase, đó là cần thiết để chuyển đổi axit
L-gulonic để AA, và, do đó đòi hỏi AA trong khẩu phần ăn của họ (Sato et al., 1976).
Axit L-ascorbic là rất không ổn định trong thức ăn; Tuy nhiên, hình thức ổn định hơn và
khả dụng sinh học của AA hiện đang có sẵn. Các dẫn xuất phosphate của AA đã được
chứng minh là có hoạt động bịnh bại huyết ở cá da trơn (El Naggar và Lovell, 1991a, b),
cá rô phi (Soliman et al, 1986; Shiau và Hsu, 1995)., Cá hồi vân (Miyasaki et al, 1992 ;
Cho và Cowey, 1993; Dabrowski et al, 1996), yellowtail (Kanazawa et al, 1992), cá bơn
Nhật Bản (Teshima et al, 1993) và tôm biển (Shigueno và Itoh, 1988; Shiau và Hsu,
1994 ). Cá vẹt là một trong những loài thủy sản mới nổi tại Hàn Quốc. Giá trị thương mại
cao của nó làm cho nó là một loài thủy sản có triển vọng trong tương lai. Tuy nhiên,
không có ước tính định tính của các yêu cầu vitamin C cho chế độ ăn uống loài này
(Ikeda et al, 1988; Ishi- bashi et al, 1992). Vì vậy, mục đích của thí nghiệm này là để
xác định ảnh hưởng của các mức khác nhau của vitamin C trong thức ăn tăng trưởng, acid
ascorbic mô và histolopatho- thay đổi hợp lý trong cá vẹt.

2. Vật liệu và phương pháp.
2.1. Khẩu phần thí nghiệm
- Thành phần của các thức ăn cơ bản bán tinh khiết được thể hiện trong Bảng 1. Sáu chế
độ ăn đã được xây dựng để chứa 0, 60, 120, 240, 480 và 2000 mg L-ascorbic acid (AA)
cho mỗi kg thức ăn ở dạng L-ascorbyl-2- monophosphate (AMP) trên cơ sở tương đương
AA, và hai chế độ ăn khác đã được xây dựng để chứa 60 và 240 mg acid L-ascorbic mỗi
kg chế độ ăn uống. Tuy nhiên, mức AA phân tích là 0, 50, 100, 205, 426 và 1869 mg AA
mỗi kg thức ăn trong khẩu phần ăn AMP-bổ sung; 36 và 149 mg AA mỗi kg thức ăn
trong axit L-ascorbic chế độ ăn bổ sung (Bảng 2). Do đó, chế độ ăn đã được chỉ định là
AA-tự do, AMP
50
, AMP
100
, AMP
205
, AMP
426
, AMP
1869
, AA
36
và AA
149
. Đã khử chất béo
bột cá đã được bổ sung vào chế độ ăn để tăng tính ngon miệng của các khẩu phần thí
nghiệm. Bột cá được chiết xuất bốn lần với ethanol nóng: (75-80
0
C, 1:2, w/v) trước khi
sát nhập vào khẩu phần ăn (Kosutarak et al., 1995). Trong chế độ ăn bổ sung với một
3

nguồn acid ascorbic, một số lượng tương đương của cellulose đã được gỡ bỏ để duy trì
mật độ dinh dưỡng thích hợp. Các thức ăn này đã được xây dựng để chứa 50% protein
thô và 21,7 kJ năng lượng thô mỗi g chế độ ăn uống. Tổng năng lượng của khẩu phần đã
được tính toán dựa trên các giá trị năng lượng thô của các thành phần riêng lẻ được đo
bằng PARR 1351 Bomb Calorimeter (Parr Instrument, Illinois, Mỹ) không bao gồm
cellulose, vitamin và khoáng trộn. Tất cả các thành phần được trộn lẫn và nén viên tại
một phòng thí nghiệm máy thức ăn viên không làm nóng sử dụng một mô-đun có đường
kính 2 mm (Công ty thương mại Baokyong, Pusan, Hàn Quốc). Sau khi chế biến, tất cả
các chế độ ăn được đóng gói vào túi nhỏ và giữ ở -80
0
C cho đến khi sử dụng.
Bảng 1 :Thành phần của các thức ăn cơ bản thử nghiệm
Thành phần (%)
Casein
1
Đã khử chất béo bột cá
2
Chất gelatin
1
Bột máu
Bột mì
α - tinh bột khoai tây
Dầu mực
3
EPA + DHA
3
Vitamin trộn
4
Khoáng trộn
5

CMC
1
Cellulose
1
Vitamin C
6

Tổng số
35,20
10.00
5.00
2.00
6.00
18,80
13,70
0.50
3.00
3.00
2.00
0,80
0.00
100.00
1
United States Biochemical (Cleveland, OH) 44122.
2
Bột cá trắng (WFM), Kum Sung Feed, Pusan, Korea.
3
E-Wha oil, Pusan, Korea.
4
Có ( g/100g trộn săn): DL-calcium pantothenate, 0.5; choline bitartrate, 10; inositol, 0.5;

menadione, 0.02; niacin, 0.5; pyridoxine– HCl, 0.05; riboflavin, 0.1; thiamine
mononitrate, 0.05; DL-a-tocopheryl acetate, 0.2; retinyl acetate, 0.02; biotin, 0.005; folic
acid, 0.018; B
12
, 0.0002; Cholecalciferol, 0.008; alph-cellulose, 87.06.
5
Có(như mg/kg khẩu phần ăn): Al, 1.2; Ca, 5000; Cl, 100; Cu, 5.1; Co, 9.9; Na, 1280;
Mg, 520; P, 5000; K, 4300; Zn, 27; Fe, 40.2; I, 4.6; Se, 0.2; Mn, 9.1.
6
L-ascorbic acid (99%, Sigma, USA) and L-ascorbyl-2-monophosphate (35% ascorbic
acid activity, Hoffman La Roche, Swiss).
4
Bảng 2: Phân tích nồng độ thực phẩm có acid ascorbic (AA, mg / kg) từ mỗi nguồn
1
Chế độ ăn uống
AA-
free
AMP
50
AMP
100
AMP
205
AMP
426
AMP
1869
AA
36
AA

149
Mức AA thêm
0 60 120 240 480 2000 60 240
Mức AA phân
tích
– 50 100 205 426 1869 36 149
1
Mức vitamin C khẩu phần được thể hiện như là hoạt động acid L-ascorbic (mg / kg thức
ăn), acid L-ascorbic đã được xác định trực tiếp bằng HPLC, hoạt động acid ascorbic
trong khẩu phần ăn AMP được tính toán sau khi phân tích các nội dung AMP trong khẩu
phần thí nghiệm (AMP được khẳng định có 35% axit ascorbic hoạt động của nhà sản
xuất).
2.2. Cá thí nghiệm và thử nghiệm cho ăn.
- Cá vẹt chưa trưởng thành (Oplegnathus fasciatus) đã được chuyển từ Geoje Marine
Hatchery (Geoje, Hàn Quốc) của Viện Nghiên cứu và Phát triển Thủy sản Quốc gia Hàn
Quốc. Trước khi bắt đầu thử nghiệm cho ăn, cá được cho ăn chế độ ăn AA-tự do trong 3
tuần để điều chỉnh chế độ ăn bán tinh khiết và làm cạn kiệt nguồn dự trữ vitamin C của
cơ thể. Thí nghiệm được tiến hành trong một hệ thống nước chảy với 60- l hồ được lọc
nước biển với tốc độ 1,2 l/phút. Sục khí bổ sung được cung cấp để duy trì lượng oxy hòa
tan gần bão hòa. Nhiệt độ nước ở 22
0
C ở đầu và 17
0
C lúc cuối kết thúc thí nghiệm theo
những thay đổi bình thường của nhiệt độ nước tự nhiên. Cá trung bình 3.9 ± 0.06 g (cân
nặng ± sai số). Đã được phân phối ngẫu nhiên với mỗi bể cá có 20 con cá và cho ăn các
khẩu phần thí nghiệm trong ba lần với tỷ lệ 4% đến 5% trọng lượng cơ thể mỗi ngày
trong 11 tuần. Tổng trọng lượng cá mỗi hồ cá sẽ được xác định sau mỗi 3 tuần, và lượng
thức ăn cho ăn được điều chỉnh cho phù hợp. Các hồ được làm sạch trong quá trình nuôi
để giảm thiểu tảo và phát triển của nấm có thể cung cấp vitamin C.

2.3. Thu thập và phân tích mẫu:
- Phần trăm tăng trọng(WG), hiệu quả thức ăn (FE), chỉ số tỷ số của gan với tổng trọng
lượng (HSI), thể tích huyết cầu (PCV), huyết sắc tố (Hb) và cơ hội sống sót đã được xác
định vào cuối kết thúc thí nghiệm. Sau khi cân nhắc các kết quả, sáu con cá đã được bắt
một cách ngẫu nhiên từ mỗi bể cá; các mẫu máu được thu được bằng cách sử dụng một
ống tiêm chống đông từ tĩnh mạch đuôi và gộp lại để thể tích huyết cầu và xác định huyết
sắc tố (Brown, 1980). Nồng độ acid ascorbic trong khẩu phần ăn có bổ sung acid L-
ascorbic đã được xác định trực tiếp bằng HPLC, và nồng độ acid ascorbic trong khẩu
phần ăn có bổ sung AMP đã được tính toán sau khi phân tích các nội dung AMP trong
khẩu phần ăn của HPLC (AMP được sản xuất bởi Hoffman La Roche, chứa 35% ascorbic
hoạt động acid). Nồng độ acid ascorbic trong mang, cơ bắp, gan và não của cá gộp lại
(năm con cá mỗi hồ cá) được xác định bằng HPLC (Syknm, Đức) với một máy dò UV ở
bước sóng 254 nm. Pha động là 0,1 M KH
2
PO
4
ở pH 2.8 và tốc độ dòng chảy là 0,4 ml /
5
phút. Mẫu được thực hiện đồng nhất trong 10% axit metaphosphoric lạnh. Tất cả được ly
tâm ở 10061xg trong 25 phút và nước nổi đã được phân tích trên HPLC sau khi lọc qua
một 0,45 mm lọc lỗ rỗng kích thước ống tiêm (Sartorius, Göttingen, Đức).
2.4. phân tích thống kê
- Tất cả dữ liệu được phân tích bằng một chiều ANOVA (Statistix 3.1, phân tích phần
mềm, St. Paul, MN, USA) để kiểm tra sự ảnh hưởng của chế độ ăn. Khi một ý nghĩa hiệu
quả điều trị đã được quan sát, một thử nghiệm khác biệt đáng kể nhất (LSD) được sử
dụng để so sánh các phương tiện. Hiệu quả điều trị được coi là có ý nghĩa ở mức P <0,05.
Mô hình bị hỏng được sử dụng để ước tính mức độ ăn uống tối ưu của vitamin C trong cá
vẹt (Robbins et al, 1979.).
3. Kết luận
- Sau 11 tuần cho ăn thử nghiệm, cân nặng của cá ăn thức ăn AMP50 và AA36 thấp hơn

so với các nhóm khác đáng kể, và cá cho ăn AMP1869 cho thấy cân nặng tăng đáng kể
hơn so với cá cho ăn AMP50, AMP100, AMP205, chế độ ăn AA36 và AA149 (P <0,05).
Tuy nhiên, không có sự khác biệt đáng kể trong tăng cân giữa cá cho ăn AMP426 và chế
độ ăn AMP1869, và giữa các loài cá ăn AMP100, AMP205, chế độ ăn AMP426 và
AA149 (Bảng3) Thức ăn hiệu quả (FE) của cá cho ăn AMP50 và AA36 là thấp hơn đáng
kể mà cá ăn AMP205, AMP426, AMP1869 và AA149, và FE cá ăn AMP186 chế độ ăn
uống là tăng so với các loài cá trong chế độ ăn khác (P <0,05).Tuy nhiên,không có sự
khác biệt trong FE ở những loài cá ăn AMP100, AMP205, AMP426 và AA149.Cá được
cho ăn chế độ ăn uống AA-free bắt đầu cho thấy dấu hiệu thiếu vitamin C, chẳng hạn như
chậm phát triển tăng trưởng, tối màu, chán ăn, dị dạng opercular và tử vong cao, sau 3
tuần kể từ ăn thử. Đến cuối tuần thứ bảy, tất cả các loài cá ăn thức ăn AA-free đã chết.Tỷ
lệ sống sót là không khác nhau giữa các loài cá ăn các AMP100, AMP205,
AMP426,AMP1869 và AA149. Tuy nhiên, cơ hội sống sót của cá cho ăn AMP50 và
AA36 thấp hơn đáng kể hơn so với cá cho ăn các khẩu phần khác, ngoại trừ cho nuôi cá
các chế độ ăn uống AA-free. Không có khác biệt lớn trong chỉ số hepatosomatic (HSI),
hematocrit (PCV) và hemoglobin trong cá cho ăn chế độ ăn khác nhau. Hàm lượng AA ở
cơ, gan, mang và não cá ăn thức ăn AMP1869 là cao hơn so với các nhóm thực phẩm
khác (Bảng 4) đáng kể. Nói chung, có khác biệt không đáng kể nồng độ mô AA từ cá cho
ăn AMP205, AMP426, và AA149. Nồng độ AA mô trong cá nuôi với chế độ AMP là cao
hơn so với cá cho ăn chế độ ăn AA ở mức AA những bổ sung như vậy. Nó có thể chỉ ra
6
rằng AA lưu giữ trong tế bào cao hơn ở những cá ăn thức ăn AMP so với cá cho ăn AA
chế độ ăn kiêng .
Bảng 3. Tác dụng của vitamin C với sáu mức độ trong chế độ ăn uống trong cá vẹt
non trong 11 tuần.
(3) tăng khối lượng (%)=(khối lượng cuối – khối lượng đầu) x 100/ khối lượng đầu
(4) hiệu quả thức ăn = tăng sinh khối của cá ăn x 100 / lượng thức ăn ăn
(5) chỉ số Hepatosomatic = (khối lượng gan/ khối lượng cơ thể ) x 100
Survival: sự sống còn
(6) PCV, Hematocrit

(7) Hb, Hemoglobin
Bảng 4. Hàm lượng acid ascorbic ở các mô (mg AA / mô kg) trong cá vẹt con ăn ở
chế độ ăn uống khác nhau vitamin C cho 11 tuần
Muscle: cơ
Liver : gan
Gill : mang
Brain : não
7
- Triệu chứng teo gan ở cá thể được quan sát thấy ở đầu của cho ăn thử sau 3 tuần nuôi
của chế độ ăn uống AA-free. Sau 11 tuần cho ăn thử, không có teo gan ở với các cá cho
ăn chế độ ăn bổ sung lớn hơn 60 mg cho mỗi kg AA chế độ ăn uống không phân biệt các
nguồn vitamin C trong khẩu phần. Tuy nhiên, 16,7% số cá ăn AMP50 và AA36 vẫn có
gan teo. Từ quan sát mô bệnh học, đó là khuyến cáo rằng mức độ bổ sung vitamin C nên
có ít nhất hơn 120 mg mỗi kg AMP chế độ ăn uống.
Hình 1. Phân tích đường ngừng tăng cân (%) trong cá vẹt ăn lượng khác nhau của
vitamin C trong khẩu phần cho 11 tuần.
=> Nghiên cứu đường ngừng tăng cân chỉ ra rằng chế độ ăn uống vitamin C yêu cầu của
cá vẹt là 118 ± 12 mg AA mỗi kg thức ăn ở dạng ofL-ascorby monophosphate.
8
Tăng cân
(%)
Tăng hàm lượng vitamin C trong thức ăn (mg/kg)
4. Thảo luận
- Nó cũng được chứng minh rằng các dẫn xuất phosphate của AA là hiệu quả như AA khi
được bổ sung trong khẩu phần ăn trên cơ sở AA tương đương hoặc AA căn cứ đẳng phân
tử trong kênh cá da trơn (Wilson năm 1989; El Naggar và Lovell năm 1991); rô phi
(Soliman năm 1986; Shiau và Hsu, 1995); cá hồi vân (Miyasaki năm 1992; Cho and
Cowey,1993; Matusiewicz năm 1995) tai vàng nhật bản (Kanazawa năm 1992)
- Ngoài ra, AMP cho thấy hoạt động acid ascorbic trong cá vẹt trong thí nghiệm. Khi cá
được cho ăn chế độ ăn bổ sung với khẩu phần ăn AMP, trọng lượng cá đã được tăng lên

đáng kể và không có triệu chứng thiếu rõ ràng trong cá cho ăn bổ sung các AA.
Matusiewicz và Dabrowski (1995) cho thấy rằng các dẫn xuất phosphate của AA có thể
được thủy phân bởi các hành động của cá hồi vân phosphatase kiềm ruột.
- Trên lâm sàng, cá ăn thức ăn AA-0 bắt đầu cho thấy dấu hiệu thiếu hụt AA, chẳng hạn
như chậm phát triển tăng trưởng, sạm da, chán ăn, dị dạng và tử vong, sau 3 tuần kể từ ăn
thử. Những dấu hiệu thiếu hụt cũng được ghi nhận ở nhiều loài khác như cá hồi (Lall năm
1990,Dabrowski năm 1996),các loài cá chép (Dabrowski năm 1988), cá cichlid (Soliman
năm 1986;Shiau và Hsu năm 1995), cá bơn (Gouillou-Coustans năm 1990) được cho ăn
vitamin C không có hoặc thiếu hụt trong khẩu phần ăn. Đến cuối tuần thứ bảy, tất cả cá
nuôi bằng chế độ ăn uống AA-0 đều chết. Tỷ lệ chết cao trong cá bơn cho ăn một chế độ
ăn uống AA-0 cũng đã được báo cáo bởi Gouillou Coustans et al. (1990), vì một suy
giảm trầm trọng của sự trao đổi chất tyrosine trong cá bơn cho ăn một chế độ ăn uống
AA-tự do có thể dẫn đến bệnh u hạt thận có thể gây tử vong cao. Điều này có thể giải
thích sự chết cao trên cá vẹt ăn Chế độ ăn uống AA-0 trong nghiên cứu này.
- Tuy nhiên, những dấu hiệu thiếu hụt vitamin C điển hình, chẳng hạn như vẹo cột sống
và ưỡn cột sống, không được thấy trong nghiên cứu này. Sau 6 tuần thử nghiệm cho ăn,
năm cá đã chết trong AMP50 và AA36groups, tương ứng. Không có chứng cứ yếu tố gây
bệnh và mô học cho thấy nhiễm trùng được ghi nhận từ mọi cá chết.
- Phân tích đường không tăng chỉ ra rằng chế độ ăn uống vitamin C yêu cầu của cá vẹt là
118+ 12 mg AA mỗi kg thức ăn ở dạng ofL-ascorbyl-2-monophosphate trên cơ sở của
Nhóm Công Tác. Các giá trị cao hơn so với chế độ ăn uống vitamin C yêu cầu của cá da
trơn (Lim và Lovell, 1978), cá hồi vân (HALVER năm 1969; Hilton năm 1978,), và
rockfish Hàn Quốc (Lee et năm 1998). Nó có thể chỉ ra rằng cá vẹt có thể có một yêu cầu
9
vitamin C cao hơn so với các loài cá khác. Tuy nhiên, giá trị yêu cầu vitamin C từ nghiên
cứu này là thấp hơn nhiều so với 250 mg AA mỗi kg thức ăn trong cá vẹt Ishibashi vào
(1992) sử dụng AA như các chế độ ăn uống nguồn vitamin C. Nó cũng được biết rằng
AA là không ổn định trong lưu trữ và chế biến khẩu phần ăn. Trong nghiên cứu này, nó
đã được tái khẳng định rằng việc sử dụng của AMP có thể dẫn đến một giảm đáng kể mất
và do đó làm giảm mức độ yêu cầu tối thiểu như được mô tả bởi Gouillou-Coustans và

Kaushik (2001). X. Wang et al. / Nuôi trồng thủy sản 215 (2003) 203-211 209
- Chúng tôi kết luận rằng trong điều kiện thử nghiệm của chúng tôi, cá vẹt có thể có một
yêu cầu vitamin C 118 mg mỗi kg AA chế độ ăn uống để hỗ trợ tăng trưởng tối đa khi L-
ascorbyl-2-monophosphate đã được sử dụng như chế độ ăn uống nguồn vitamin C.
II. Lời cảm ơn
Thí nghiệm này đã được hỗ trợ một phần bởi Quỹ Quốc gia Pukyong Đại học Nghiên cứu
và Feeds và Thực phẩm Trung tâm nghiên cứu dinh dưỡng tại Đại học Quốc gia Pukyong
của Hàn Quốc. L-ascorbyl-2-monophosphate được vui lòng cung cấp bởi Ewha dược,
Hàn Quốc.
III. Tài liệu tham khảo.
10