Thiết bị và kỹ thuật cnsh
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (2.46 MB, 26 trang )
<span class="text_page_counter">Trang 1</span><div class="page_container" data-page="1">
<b>KỸ THUẬT LAMP TRONG XÉT NGHIỆM VÀ CHẨN ĐOÁN VIRUS GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG (WSSV) </b>
<b>TRÊN TÔM</b>
GVHD: T.S Huỳnh Văn Biết
<b>TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HCM</b>
Khoa Khoa Học Sinh Học
</div><span class="text_page_counter">Trang 4</span><div class="page_container" data-page="4"><b>Tổng quan kỹ thuật Lamp</b>
<small>4</small>
</div><span class="text_page_counter">Trang 5</span><div class="page_container" data-page="5"><b>Kỹ thuật LAMP• Phát triển từ PCR truyền thống• Sử dụng 4 – 6 đoạn mồi đặc hiệu </b>
<b>tạo cấu trúc vịng móc giúp q trình tổng hợp DNA diễn ra liên tục trong điều kiện đẳng nhiệt.</b>
<small>LAMP (Loop Mediated Isothermal Amplification)</small>
</div><span class="text_page_counter">Trang 6</span><div class="page_container" data-page="6"><b>Video về kỹ thuật LAMP</b>
<small>6</small></div><span class="text_page_counter">Trang 7</span><div class="page_container" data-page="7"><b>Điểm khác nhau LAMP và PCR</b>
<b> Sự khuếch đại đặc hiệu cao vì có đến 2-3 cặp mồi nhận biết 6-8 vùng </b>
<b>riêng biệt trên ADN khuôn.</b>
Trong phương pháp LAMP lượng
<b>ADN tổng hợp được lớn hơn gấp </b>
nhiều lần so với PCR.
Phương pháp LAMP có thể thực
<b>hiện khuếch đại RNA bằng cách bổ </b>
<b>sung thêm enzyme phiên mã </b>
<b>ngược vào trong hỗn hợp phản ứng.</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 8</span><div class="page_container" data-page="8"><b>Có nên sử dụng LAMP thay thế PCR khơng?</b>
<b>Trong các xét nghiệm chẩn đốn, LAMP cho thời gian trả kết quả nhanh, sử dụng trong các xét nghiệm định tính. Tuy nhiên, nếu xét nghiệm yêu cầu định lượng; giải pháp </b>
<b>real – time PCR là lựa chọn tối ưu</b>
<small>8</small>
</div><span class="text_page_counter">Trang 9</span><div class="page_container" data-page="9"><b>Ứng dụng của kỹ thuật LAMP</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 11</span><div class="page_container" data-page="11"><b>Kỹ thuật LAMP trong chẩn đoán virus WSSV </b>
<b>gây bệnh ở tôm</b>
<b>II</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 12</span><div class="page_container" data-page="12"><small>virus gây ra, thường gặp ở các lồi thuộc Họ Tơm he. Bệnh có khả năng lây lan cao và gây chết tơm một cách nhanh chóng</small>
<b><small>Virus gây bệnh đốm trắng (WSSV) là một loại virus </small></b>
<i><small>đơn độc thuộc chi Whispovirus, chi duy nhất trong họ </small></i>
<i><small>Nimaviridae.Chúng là nguyên nhân gây ra bệnh đốm </small></i>
<small>trắng ở hầu hết các loài động vật giáp xác.</small>
<small>12</small>
</div><span class="text_page_counter">Trang 13</span><div class="page_container" data-page="13"><b><small>Giai đoạn cận cấp tính</small>Giai đoạn cấp tính</b>
<small>Tơm nhiễm bệnh chết tùy theo chất </small>
<small>lượng nước</small> Tôm nuôi chết rất nhanh ( từ 80% trở lên) trong 1-5 ngày sau khi xuất hiện các dấu hiệu bệnh
Có thể thấy hoặc khơng thấy
đốm trắng <sup>Bơi lội lờ đờ</sup>
<small>Tơm ít ănNgừng ăn</small>
<small>Bơi lội chậm chạpTôm hấp hối tập trung gần mặt nước quanh bờ aoChết tích lũy 30-80 %Vỏ giáp đầu ngực lơi lỏng</small>
<b><small>Giai đoạn mãn tính:</small></b> <small>Ngoại ký sinh bám đầy vỏ và mang.</small>
<small>Tôm không chết</small> Ruột giữa màu trắng chạy dọc theo bụng ở ấu trùng và tơm giống nhiễm bệnh.
Có thể có hay khơng có đốm <small>Khi bóc tách vỏ giáp đầu ngực, soi dưới ánh sáng sẽ thấy các đốm </small>
<b>DẤU HIỆU BỆNH LÝ</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 14</span><div class="page_container" data-page="14"><small>14</small>
</div><span class="text_page_counter">Trang 16</span><div class="page_container" data-page="16"><b>Chuẩn bị virus và DNA mẫu của virus</b>
Lượng máu tan sau đó sẽ được phân loại bằng máy ly tâm ở điều kiện thích hợp.
Các virion (toàn bộ hạt virus truyền nhiễm) WSSV được cô đặc từ dịch tan máu của tôm Kuruma bị nhiễm bệnh pháp chiết nhiệt. Chất nổi phía trên được sử dụng làm DNA mẫu cho mỗi thí
</div><span class="text_page_counter">Trang 18</span><div class="page_container" data-page="18"><b>Thiết kế đoạn mồi</b>
<b>Mồi xuôi bên trong WSSV-FIP: 5’-GGGTCGTC </b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 20</span><div class="page_container" data-page="20"><b>Phát hiện WSSV trong mơ tơm bằng LAMP</b>
• Tách chiết DNA từ mơ tơm
(tim, dạ dày) và cơ quan bạch
</div><span class="text_page_counter">Trang 21</span><div class="page_container" data-page="21"><b>Kết quả</b>
Phát hiện WSSV-DNA bằng LAMP từ tim tơm khỏe mạnh (âm tính) và
nhiễm WSSV (dương tính)Tất cả các sản phẩm đều được điện di trên gel agarose 2% và nhuộm bằng ethidium bromide trong 60 phút ở 65 ◦C
</div><span class="text_page_counter">Trang 22</span><div class="page_container" data-page="22"><b>Kết Luận</b>
<small>22</small>
</div><span class="text_page_counter">Trang 23</span><div class="page_container" data-page="23"><b> LAMP là phương pháp hứa </b>
<b>hẹn chẩn đoán nhanh trong trường hợp nhiễm WSSV</b>
<b> Lamp thường xuyên để </b>
<b>kiểm tra tôm trong trại giống và ao nuôi thương phẩm để có thể tìm thấy tơm mang virus trong </b>
<b>Kết Luận</b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 24</span><div class="page_container" data-page="24"><b>Hiện tại chưa có biện </b>
<b>pháp nào hiệu quả để điều trị WSSV. Chỉ có </b>
<b>thể duy trì kiểm sốt </b>
<b>mơi trường ao nuôi tốt </b>
để giảm virus WSSV xuất
<b>hiện trong ao ni. </b>
</div><span class="text_page_counter">Trang 25</span><div class="page_container" data-page="25"><b>Tài liệu tham khảo</b>
• “Dấu hiệu của bệnh đốm trắng ở tôm sú và cách phòng tránh - điều trịbacsinhanong.com. Bác Sĩ Nhà Nơng”. Retrieved October 21, 2023, from
u-va-cach-phong-tranh-dieu-tri/
• Tổng quan về kỹ thuật Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) – CÔNG TY TNHH KHOA HỌC NKTBIO. (2022, December 19). CÔNG TY TNHH KHOA HỌC NKTBIO. Retrieved October 21, 2023, from
othermal-amplification-lamp/
• Tomoya Kono; Ram Savan; Masahiro Sakai; Toshiaki Itami (2004). Detection of white spot syndrome virus in shrimp by
loop-mediated isothermal amplification. , 115(1), 59–65.
</div><span class="text_page_counter">Trang 26</span><div class="page_container" data-page="26"><small>26</small>
</div>
