KỸ THUẬT BẢO QUẢN HOA


MỤC LỤC
BÀI 1: PHA MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY .............................................................. 1
1. Dụng cụ: .............................................................................................................. 1
2. Chuẩn bị túi môi trường: ..................................................................................... 1
3. Chuẩn bị hố chất: ............................................................................................... 2
4. Pha mơi trường: ................................................................................................... 3
5. Kết quả và nhận xét: ............................................................................................ 5
BÀI 2: CẤY ............................................................................................................... 6
1. Chuẩn bị hạt: ....................................................................................................... 6
2. Tiền hành cấy: ..................................................................................................... 7
3. Kết quả và nhận xét: ............................................................................................ 9
BÀI 3: PHA DUNG DỊCH DINH DƯỠNG HOAGLAND ................................. 11
1. Dụng cụ: ............................................................................................................ 11
2. Hoá chất: ........................................................................................................... 11
3. Tiến hành:.......................................................................................................... 11
4. Kết quả và nhận xét: .......................................................................................... 11
BÀI 4: ƯƠM HẠT VỚI DUNG DỊCH HOAGLAND ........................................ 13


BÀI 1: PHA MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY
1. Dụng cụ:
- Cân điện tử
- Nồi
- Túi nilon
- Máy khuấy từ
- Pipet
- Cốc đong, ống đong
- Nồi hấp

- Bình thuỷ tinh

Cân điện tử

Pipet

Máy khuấy từ

Nồi hấp
2. Chuẩn bị túi mơi trường:
Kích thước: 20x15 (cm)
Tiến hành: gấp đấy túi, chồng lại với nhau chuẩn bị hấp
Hấp trong 30p ở 121oC
1


3. Chuẩn bị hoá chất:
* Thành phần Đa lượng:
Thành phần

Khối lượng trong 1 lít

Khối lượng trong 5lit

NH4NO3

1650 mg

8250 mg


KNO3

1900 mg

9500 mg

KH2PO4

170 mg

850 mg

MgSO4.7H2O

370 mg

1850 mg

440 mg

2200 mg

Thành phần

Khối lượng trong 1 lít

Khối lượng trong 5lit

MnSO4.4H2O


22.3 mg

111.5 mg

H3BO3

6.2 mg

32.7 mg

ZnSO4.7H2O

8.6 mg

43 mg

KI

0.83 mg/1 ml

4.15 mg

Na2MoO4.2H2O

0.25 mg/1 ml

1.25 mg

CoCl2.6H


0.2525 mg/1 ml

0.12625 mg

CaCl2.2H2O
*Thành phần Vi lượng:

2


*Vitamin:
Thành phần

Khối lượng trong 1 lít

Khối lượng trong 5lit

Meso-inosito

100 mg

500 mg

Pirydoxine HCl (B6)

0.5 mg

2.5 mg

Nicotinic acid(P.P)


0.5 mg

2.5 mg

Thiamin –HCl(B1)

0.1 mg

0.5 mg

Glycine

2 mg

10 mg

BA

0.5 mg

2.5 mg

Thành phần

Khối lượng trong 1 lít

Khối lượng trong 5lit

Na2EDTA


0,18625 g

186.25 mg

FeSO4.7H2O

0,13925 g

139.25 mg

*NaFe- EDTA

- Đường: 30 g/l = 150 g/5l
- Agar : 8.5 g/l = 42.5 g/5l
4. Pha mơi trường:
- Cân hố chất
- Pha stock 1 đa lương  Stock 2 vi lượng  stock 3 vitamin  NaFe –
EDTA  Đường  Agar
- Sử dụng máy khuấy từ khuấy tan từng chất
- Dùng nước cất và ống đong 1 lít định mức thành 5 lít
- Kiểm tra pH của môi trường nằm trong khoảng 5.8-6 là được.
- Rót mơi trường sau khi pha vào các bình thuỷ tinh, đậy kỹ miệng bình.
- Cho vào nồi hấp và tiến hành hấp với thời gian 30phút ở nhiệt độ 121oC
- Chuẩn bị 5 bình nước cất hấp cùng với môi trường.
- Sau khi hấp xong được chuyển tủ cấy mà để tiến hành rót mơi trường vào túi
đựng mối trường hấp.

3



Cân hóa chất
* Tiến hành rót mơi trường

Pha mơi trường

- Mặc áo blue trước khi vào phòng cấy
- Khởi động tủ cấy  lau tủ cấy bằng dung dịch khử trùng.
- Di chuyển môi trường, nước cất và túi đựng môi trường sau khi hấp xong
vào tủ cấy để tiến hành rót.
- Khử trùng tay trước khi thực hiện việc rót mơi trường.

Rót mơi trường

Ghim túi sau khi rót

4


5. Kết quả và nhận xét:
- Trong quá trình cân hóa chất cần chú ý đảm bảo lượng hóa chất và tránh việc
cân nhầm hóa chất.
- Túi mơi trường khi gấp phải đảm bảo các nếp gấp tránh không bị bung khi
đổ môi trường.
- Khi hấp môi trường, nước cất và túi dựng môi trường phải đảm bảo môi
trường và nước cất được đậy kín miệng bình, thời gian hấp và nhiệt độ hấp đảm bảo
121oC trong 30 phút.
- Trước khi tiến hành rót mơi trường trong tủ cấy phải khỏi động tủ và vệ sinh
tủ bằng dung dịch khử trùng để đảm bảo vơ trùng trong q trình rót môi trường
tránh gây nhiểm khuẩn cho môi trường.

- Môi trường sau kho rót vào túi phải được ghim lại và đánh dấu.
- Trong q trình rót tránh việc chạm tay vào bên trong túi để tránh gây nhiễm
khuẩn cho môi trường.

Môi trường sau khi hấp

Nước cất

5


BÀI 2: CẤY
1. Chuẩn bị hạt:
Giống: Đậu nành, đậu đen, chè:
Tiền hành:
- Chọn hạt có chất lượng tốt  Ngâm hạt trong nước Javen trong 10p  rửa
sạch bằng nước  Ngâm hạt trong nước cất đã tiệt trùng  chuyển vào tủ cấy.

Chọn hạt

Ngâm hạt trong Javen

6


2. Tiền hành cấy:
* Cách thực hiện:
- Mặc áo blue trước khi vào phòng cấy
- Khởi động tủ cấy  lau tủ cấy bằng dung dịch khử trùng.
- Chuẩn bị dụng cụ cấy (kẹp, dao, đĩa, thùng chứa..), khử trùng dụng cụ cấy

trước khi cấy
- Khử trùng tay trước khi cấy
- Bắt đầu tiền hành cấy theo hướng dẫn của GV.
- Nghi rõ ngày tháng cấy và giống cây.

Lắp dao cấy

7


Khử trùng dụng cụ cấy

Xử lý lại hạt giống trước khi tiến hành cấy

8


Q trình cấy giống vào mơi trường
3. Kết quả và nhận xét:
* Nhận xét:
- Chú ý khử trùng thật kỉ trước khi tiến hành cấy.
- Trong quá trình cấy cần khử trùng lại dụng cụng cấy để đảm bảo tránh gây
nhiểm khuẩn.
- Hạt giống phải được xử lý tốt trước khi cấy nhằm loại bỏ nấm, mốc có thể
gây nhiểm bệnh trong quá trình cấy.
- Các thao tác cần phải có độ chính xác cao, tránh tiếp xúc trực tiếp với những
vật dụng đã khử trùng, miệng túi,..
- Trong quá trình cấy khơng được cho tay hay dụng cụ cấy ra khỏi tủ cấy, nếu
có cần phải khử trùng lại trước khi đưa vào tủ cấy.
- Các túi môi trường trước khi đưa vào tủ cấy phải được khử trùng cẩn thận.

- Sau khi cấy xong các túi môi trường cần được đánh dấu và sau đó mang tới
phịng ni cấy và theo dõi.
9


* Kết quả:
Sau khi được cấy và ni tại phịng ni cấy 2 tuần thì tỉ lệ cây phát triển là
70% trong đó tất cả các hạt chè sau khi cấy đều khơng phát triển chiếm 20% cịn lại
10% hạt đậu nành và đậu đen bị nhiễm bệnh và không phát triển.
Một số lý do dẫn đến hạt không nảy mầm và nhiễm bệnh là do:
- Chất lượng hạt không tốt
- Hóa chất khơng chính xác, đinh dưỡng trong mơi trường không đều dẫn đến
cây phát triển không đều.
- Thao tác trong q trình cấy khơng đảm vơ trùng gây nhiễm trùng đến môi
trường và hạt.

Mầm cây phát triển tốt (5cm)

Mầm cây phát triển yếu (1cm)

Mầm cây phát triển chậm (3cm)

Mầm cây bị nhiễm khuẩn

10


BÀI 3: PHA DUNG DỊCH DINH DƯỠNG HOAGLAND
1. Dụng cụ:
- Cân

- Pipe
- Máy khuấy từ
- Cốc đơng
- Bình định mức
2. Hố chất:
Bình
1
2
3
4

5

Hố chất
2M KNO3
1M KH2PO4
2M Ca(NO3)2.4H2O
2M MgSO4.7H2O
1M NH4NO3
Iron (Sprint 138 iron
chelate)
H3BO3
MnCl2.4H2O
ZnSO4.7H2O
CuSO4.5H2O
H2MoO4.H2O
Na2MoO4.2H2O

dd gốc
(g/l)

202
136
472
493
80

(mg/l)

Trong 50lit

505
136
1180
493
80

25250
6800
59000
24650
4000

15

22.5

1125

2.86
1.81

0.22
0.051
0.09
0.12

2.86
1.81
0.22
0.051
0.09
0.12

143
90.5
11
2.55
4.5
6

3. Tiến hành:
- Hoá chất được pha cho từng bình sau đó định mức lên 1 bình 500ml sau đó
dán nhãn cho từng bình.
- Lấy mỗi bình 10ml sau đó định mức lên 1lit thu được dd dinh dưỡng
Hoagland tưới cho cây.
4. Kết quả và nhận xét:
- Sau khi pha thu được 5 bình chứa 5 dung dịch như trên dùng cho 50lit nước.
- Cần chú ý trong q trình pha hóa chất tránh nhầm lẫn giữa các bình với
nhau.
- Kiểm tra pH sau khi pha đạt từ 6.5-7


11


Dung dịch pha xong được mãng trong phòng đèn led để lưu trữ

12


BÀI 4: ƯƠM HẠT VỚI DUNG DỊCH HOAGLAND
- Chọn hạt đậu nành và đậu đen có chất lượng tốt mang đi xử lý bằng nước
Javen
- Ngâm trong nước Javen 10p sau đó rửa sạch bằng nước máy.
- Chuẩn bị đất: sử dụng đất tơi xốp được lấy ngoài trời tại A11
- Sử dụng các hộp nhựa đã đục lổ dưới đáy, cho đất đã được chuẩn bị vào và
tiến hành gieo hạt.
- Mỗi hộp là 10 hạt (5 đậu đen và 5 đậu nành)
- 4 hộp cho 2 nghiệm thức
a) Theo dõi trong điều kiện tự nhiên: 1 sử dụng dd Hoagland, 1 đối chứng.

Có chứa dd Hoagland

Khơng chứa dd Hoagland

Theo dõi ở điều kiện bình thường
13


b) Theo dõi trong phịng ni cấy có đèn led: 1 sử dụng dd Hoagland, 1 đối
chứng.


Có chứa dd Hoagland

Khơng chứa dd Hoagland

Theo dõi trong mơi trường có đèn led chiếu sáng

14


* Kết quả và nhận xét:
Sau 1 tuần
 Đối với nghiệm thức ở điều kiện tự nhiên

Hộp có chứa dd Hoagland hạt bắt đầu nảy mầm, một số hạt bị nhiễm khuẩn
và không nảy mầm.

Hộp không chứa dd Hoagland hạt bắt đầu nhú mầm.

15


 Đối với nghiệm thức được chiếu sáng bằng đèn led

Hộp khơng chứa dung dịch Hoagland hạt có hiện tượng nảy mầm

Hộp có chứa dung dịch Hoagland hạt bắt đầu nảy mầm, mầm nhú ra khỏi vỏ
hạt.
Nhận xét:
- Sau 1 tuần tỉ lệ nảy mầm của hạt ở cả hai điều kiện còn rất thấp khoảng 20%
- Sau 2 tuần ở điều kiện hộp sử dụng dinh dưỡng Hoagland phát triển tốt. Hộp

khơng có dung dịch hoagland có bắt đầu nảy mầm.

16


- Sau 2 tuần ở điều kiện chiếu sáng bằng đèn led hộp sử dụng dinh dưỡng
Hoagland phát triển tốt. Hộp khơng có dung dịch hoagland bắt đầu nảy mầm.
- Một số lý do khiến tỉ lệ nảy mầm thấp là:
+ Q trình xử lý hạt khơng tốt.
+ Hạt để quá lâu nên chất lượng nảy mầm kém.
+ Quá trình gieo hạt quá sau làm giảm khả năng nảy mầm của hạt.

17